Matricos nario padidejimas

Jų pasirinkimas priklauso nuo analizuojamų kintamųjų skirstinių, vertinamų ryšių formų ir t. Formuluojant išvadas apie koreliacijos koeficiento reikšmes, visada reikia neužmiršti, kad statistiškai reikšmingas ryšys dar nereiškia, kad jis yra reikšmingas priežasties-pasekmės ryšys. Padidėjęs MMP aktyvumas po 45 min. MMP-9 slopinimas sumažino fluorescenciją, sukeltą 45 min.

Ilgalaikis potencialas Anotacija Dėl kokaino vartojimo atsinaujinimo būtina modifikuoti eritacines sinapsines branduolio accumbens'e ir sinapsinis reorganizavimas reikalauja, kad matricos metaloproteinazės MMP skaidytų ekstraląstelinės matricos baltymai. Mes nustatėme ilgalaikį MMP-2 aktyvumo padidėjimą žiurkėms, pasitraukus iš savarankiškai vartojamo kokaino, ir trumpalaikį MMP-9 padidėjimą, kai pasireiškė kokaino atkrytis.

Cue sukeltas heroino ir nikotino recidyvas padidino MMP aktyvumą, o padidėjęs MMP aktyvumas reikalingas tiek kokaino atkryčiui, tiek su recidyvu susijusiam sinaptiniam plastiškumui. Pagrindinis Pažeidžiamumas recidyvui yra narkomanijos ypatybė, o recidyvo kontrolė yra pagrindinis gydymo tikslas gydant priklausomybę 1.

Nesugebėjimas kontroliuoti narkotikų vartojimo yra susijęs su neuropatologijomis striatrijos grandinės korekcijos reguliavime, įskaitant konstitucinį gleivinės glutamaterginės sinapso potencialą branduolio accumbens šerdyje NAcore 2, 3 ir tolesnį trumpalaikį sinaptinį potencialą t-SPkai recidyvas yra kokaino injekcijomis arba kokainu susijusiais užuominais 4, 5.

Nors šie tyrimai parodė, kad norint atsinaujinti su kokaino vartojimu reikia atlikti sinaptinį potencialą glutamaterginių sinapsijų atveju, nėra suprantama, kaip stabilizuojamas ilgalaikis potencialas po atsitraukimo arba kaip pradedamas su recidyvu susijęs t-SP. MMP-2 ir MMP-9 sudaro želatinazės 7 apatinę grupę, reguliuojančią sinaptinę struktūrą ir fiziologiją, proteolitiškai apdorojant Matricos nario padidejimas glikoproteinus, kad būtų inicijuotas glutamato receptorių nelegalumas ir aktino polimerizacija 6, 8.

Naudojant recidyvo kokaino, heroino ir nikotino savarankiško vartojimo ir grįžimo į žiurkes modelį, išbandėme hipotezę, kad MMP-2 ir MMP-9 yra reikalingi tiek cue-indukuotam atstatymui, tiek susijusiam sinaptiniam plastiškumui. Žiurkės buvo apmokytos savarankiškai vartoti kokainą, heroinas ar nikotinas ir svirtis buvo išnykę 1a pav. Ir papildomas 2 pav. Vėliau papildomas 2 pav. Gelatinazės aktyvumas buvo padidėjęs užgęsta kokaino NAcore, palyginti su žiurkėmis su druskomis, ir 15 min.

Sukeltas atstatymas sukėlė tolesnį padidėjimą 1b — e pav. MMP aktyvumo padidėjimas sugrįžo iki išankstinio atkūrimo lygių min.

Žiurkėms, mokomoms savarankiškai vartoti nikotiną, po ekstinkcijos pasireiškė konstituciškai padidėjęs MMP aktyvumas, o tiek nikotino, tiek heroino treniruotoms žiurkėms po 15 min. Kai su kokainu apmokytos žiurkės buvo vėl įdėtos naudojant nepageidaujamą kokaino injekciją, konstantinis MMP aktyvumo padidėjimas buvo pašalintas 15 min. Po injekcijos, bet atsinaujino 45 min.

Kaip rasti matricos determinantą? Išsilavinimas: Matricos determinanto nustatymas yra svarbusveiksmas ne tik tiesine algebra: pavyzdžiui, ekonomikoje ši sistema išsprendžia sistemines linijų lygtis su daugybe nežinomų, kurios yra plačiai naudojamos ekonominėse problemose. Determinanto koncepcija Matricos determinantas arba determinantasvadinamas lygiagrečiojo sraigto, sumontuoto ant jo eilučių vektorių ar stulpelių, kiekis.

Fluorescencijos padidėjimas buvo lokalizuotas NAcore neuronų soma ir dendritais 1f pav. Nerasta MMP aktyvumo padidėjimo nugaros striatum ar accumbens lukštuose po 15 min.

Sukeltos atkūrimo papildomas Fig. Išskirtinė linija apibūdina priekinę komisiją AC ir injekcijos vietą, kuri buvo užmaskuota kiekybiniam įvertinimui duomenys yra keturių NAcore skiltelių vidurkis vienoje žiurkėje. Svarstyklės sudaro μm.

Gauk nemokamą VERSLO VALDYMO savaitraštį į savo el.pašto dėžutę:

Skalės juostos sudaro μm. Viso ilgio geliai rodomi papildomame 9 paveiksle. Be to, Mmp2 arba Mmp9 mRNR skirtumas tarp yoked -fiziologinio tirpalo ir pakartotinai veikiančių žiurkių papildomas 4b pav.

Nenustatytas, o tai rodo, kad MMP-2 ir MMP-9 aktyvumo padidėjimas greičiausiai atsiranda dėl baltymų aktyvacijos, o ne baltymų sintezės6. Po to, kai vėl buvo atnaujintas kokaino vartojimas su ūmia kokaino injekcija 1 pav. Atvirkščiai, fluorescencijos padidėjimas po 15 min. Padidėjęs MMP aktyvumas po 45 min.

Kaip rasti matricos determinantą?

Po kokaino sukeltos Talk Show priartinimo narys taip pat buvo užkirstas kelias MMP-9i 2a pav. Šis želatinazės ekspresijos modelis atitinka darbą, rodantį, kad smegenys išreiškia MMP-2 aktyvumą, o MMP-9 yra laikinai sukeltas išorinių dirgiklių Duomenys, rodomi palyginus, rodomi 1b paveiksle. MMP-9 slopinimas sumažino fluorescenciją, sukeltą 45 min. Skaičiai juostose rodo žiurkių skaičių.

Atstatytos svirties paspaudimo Matricos nario padidejimas sinapsijos t-SP 4, 5. Papildomas 5 pav. Konstantinis dh padidėjimas žiurkėms po ekstinkcijos priklausė nuo MMP-2 aktyvumo, o padidėjimas po 15 min. Stuburo tankis buvo padidėjęs gesinant kokainą, palyginti su žiurkėmis su sūkurine druska, bet jokio tolesnio pakilimo nepadarė, kai buvo pradėtas pakartotinis stimuliavimas 2d pav.

Ir papildomas Fig. MMP-2i, bet ne MMP-9i, stuburo tankis tiek išnykusiose, tiek pakartotinai išnykusiose žiurkėse buvo normalizuotas pagal jungiamojo tirpalo koncentraciją.

Kartu su dh matavimu šie duomenys rodo, kad grįžimas yra susijęs su esamų stuburo dydžio d h laikinu didinimu, o ne naujų spygliais, Matricos nario padidejimas kad MMP-2 aktyvumas Nuotrauku tie, kurie padidino savo varpa stuburo skaičiaus padidėjimą žiurkėms po išnykimo, kurie yra išnykę.

Bet kurio inhibitoriaus mikroinjekcija, priklausomai nuo kontrolinio, sumažina dozę priklausomai nuo gydymo žr. Ir papildomą Fig. MMP-9i taip pat sumažino kokaino sukeltą atstatymą 2 pav. Atsižvelgiant į tai, kad nepavyko sinapcinio potencialo didėjimo NAcore metu sukeltos sacharozės atkūrimo 5 metu, nė vienas inhibitorius nesumažino sūkurio sukeltos svirties atkūrimo sacharozės granulėms 2 pav. MMP priklausomybėje rodo, kad MMP9 genų ekspresija pasikeitė priklausomybės nuo kokaino smegenyse 15 ir heroino priklausomųjų serume 16, ir MMP9 geno polimorfizmas, susijęs su priklausomybe nuo alkoholio Be to, neselektyvių MMP inhibitorių vidinė cerebroventrikulinė injekcija Matricos nario padidejimas vaistų ieškojimą gyvūnų modeliuose 18, Mūsų duomenys rodo specifinį ir būtiną MMP-2 ir MMP-9 vaidmenį ilgalaikiame pažeidžiamume recidyvui ir siūlo ECM signalizacijos tyrimą kaip mokslinių tyrimų temą, skirtą suprasti ir gydyti priklausomybę.

Metodai Gyvūnų laikymas ir chirurgija. Vyriški Sprague-Dawley žiurkės g; Charles River buvo atskirai laikomi Matricos nario padidejimas val. Visi eksperimentai įvyko tamsios fazės metu, o gyvūnams buvo leista prisitaikyti prie vivariumo aplinkos 4 d prieš operaciją.

Žiurkės buvo senos, kai jos buvo anestezuotos ketamino HCl ir ksilazino deriniu, ir gavo ketorolaką analgezijai. Visos žiurkės gavo intrajugulinius kateterius, o žiurkės mikroinjekcijos eksperimentams gavo intrakranijinę kanulę, nukreiptą 2 mm virš NAcore, dorsolateralios striatum arba NA lukšto Žiurkės buvo maistas, apribotas iki 25 g žiurkių česnako per d.

1. Kaip tinkamai suformuoti valdybą. Matricos pavyzdys - Verslo žinios
2. Padidinkite, kaip padaryti naria
3. Matricos organizacija: apibrėžimas, veikimas ir apribojimai
4. Koreliacinės ir regresinės analizės pagrindai

Visi naudojami metodai atitiko JAV Nacionalinius sveikatos priežiūros institutus, skirtus gyvūnų priežiūrai ir naudojimui, ir juos patvirtino Pietų Karolinos medicinos universiteto Institucinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas.

Naudoti vaistai. Kokaino HCl tiekė Nacionalinis piktnaudžiavimo narkotikais institutas. Narkotikų savęs administravimas ir atkūrimas. Atsigavimo po operacijos žiurkėms buvo atlikta vienos nakties 12 val. Kitą Matricos nario padidejimas gyvūnai kasdien prasidėjo 2 val.

Savarankiškai SA sesijų, skirtų kokainui arba nikotinui, arba 3 h SA sesijai heroinui 5, 22, SA metu vaistas buvo pristatytas naudojant FR1 grafiką, po kiekvieno infuzijos 20 sekundžių. Aktyvios svirties presai, dėl kurių susidarė kokainas kokaino hidrochloridas, 0, 2 Matricos nario padidejimas per infuziją; Nacionalinis piktnaudžiavimo narkotikais institutasheroinas heroino hidrochloridas, μg per infuziją 1 ir 2 dienomis, 50 μg per infuziją 3 ir 3 dienomis.

Neaktyvus atsakymas taip pat buvo skirtas neaktyviam atsakymui kontroliuoti. Daugeliu atvejų MMP inhibitoriaus arba nešiklio mikroinjekcijos buvo įvestos 15 min. Elgesio eksperimentams 2e pav. Šioje procedūroje kiekvienas žiurkė gavo kiekvieną sąlygą MMP-2i, MMP-9i arba transporto priemonę pagal lotyniško kvadrato dizainą.

Žiurkės turėjo atitikti išnykimo kriterijus prieš kiekvieną atkurimo bandymą. Atkūrimo sesijos truko min.

Gerbiamasis skaitytojau,

Elgsenos eksperimente, o zymografijai, stuburo morfologijai ir A: N eksperimentams - 15, 45 arba min. Atkūrimo seansai, kuriais žiurkės buvo nužudytos tolesniems matavimams.

Kai žiurkės buvo priskirtos skirtingoms vaistų grupėms, lyginant su sūkurinėmis druskomis, jos buvo priskirtos atsitiktinai. Kai žiurkėms buvo priskirtos gesintos arba atstatytos grupės, jos buvo paskirtos siekiant išlaikyti vienodą dispersiją ir vidutinį vaistų infuzijų skaičių per paskutinius 3 savanoriškus vaistus. In vivo zymografija.

Kadangi MMP yra išskiriami neaktyviuose pro-formuose ir kataliziškai aktyvuojami ECM, aktyvumo tyrimai yra geresni nei baltymų kiekio imunoblotavimas, siekiant įvertinti MMP funkcijos pokyčius Mes naudojome in vivo zymografijos tyrimą MMP aktyvumui tiesiogiai matuoti.

Gautas fluorescencijos kiekis sudaro linijinį ryšį su inkubacijos laiku ir MMP aktyvumu papildomas 1 pav. Papildomai fiksacijai. Vibratomas buvo naudojamas gauti 50 μm sekcijas per NAc.

Sekcijos buvo sumontuotos ir uždengtos. Buvo vaizduojami tik tie griežinėliai, kuriuose gali būti Matricos nario padidejimas injekcijos vieta ir priekinė komisija. ImageJ JAV nacionaliniai sveikatos institutai buvo naudojama vaizdams įvertinti. Visuose kiekybiškai įvertintuose vaizduose buvo priekinė komisija, kuri buvo užmaskuota, kad būtų išvengta kiekybinio įvertinimo. MMP aktyvumas yra indukuotas kaip ūminio uždegiminio atsako į mikroinjektorių audinių pažeidimus dalis, todėl mikroinžektoriaus trasas buvo lengvai matomas visose kiekybiškai įvertintose sekcijose dėl lygiaverčio aukšto fluorescencijos visose gydymo grupėse 1 pav.

Šis traktas taip pat buvo užmaskuotas, kad būtų pašalintas kiekybinis MMP aktyvumas, kurį sukelia mikroinjekcijos sukeltas ūminis pažeidimas. Fluorescencija buvo kiekybiškai įvertinta kaip integruotas tankis iš keturių pjūvių viename žiurkėje, o integruoti tankiai buvo apskaičiuoti kiekvieno žiurkės vidurkiu ir normalizuoti pagal jungiamojo tirpalo kontrolines vertes. Tankio kiekybinį nustatymą atliko individas, užsikimšęs gydymo grupei. Western blotting.

Žiurkės buvo greitai išnyktos po to, kai išnyko kokainas savarankiškai vartojant arba išgėrus druskos tirpalą, arba po 15 arba 45 min. Homogenatas centrifuguojamas 4 ° C temperatūroje 5 min. Supernatantas Matricos nario padidejimas ir baltymų koncentracija buvo Matricos nario padidejimas naudojant biconchininės rūgšties tyrimą Thermo Scientific.

Kiekvienas vakarų blotas buvo kartojamas du kartus. NAcore smegenų audinys buvo išskaidytas iš Matricos nario padidejimas arba fiziologinio tirpalo, kuris buvo nužudytas paskutinę išnykimo mokymo dieną. Atvirkštinė transkripcija buvo atlikta 37 ° C temperatūroje 1 val. PCR reakcijos buvo surenkamos taq PCR pagrindiniame mišinyje Qiagen su 35 pmol kiekvienu pradmenų rinkiniu, išsamiai aprašytu žemiau, ir 6 μl cDNS kaip šabloną, gaunant galutinį 20 μl reakcijos tūrį.

Kiekvieno PCR vykdymo metu šablonų neigiami kontroliniai tyrimai nebuvo atliekami ir juose nebuvo produktų, be to, buvo ištirti minuso RT mėginiai ir nebuvo nustatyta produkto susidarymo duomenys nerodomi.

Dendritinių stuburo galvos morfologijos kiekybinis nustatymas.

Atvirkštinės matricos radimas gauso metodu

Smegenys buvo pašalintos ir po to fiksuotos tame pačiame fiksatoriuje 30 min. Stuburo morfologija buvo atlikta kaip aprašyta anksčiau Optimalus mėginių ėmimo dažnis buvo apskaičiuotas naudojant Nyquist-Shannon mėginių ėmimo teoremą.

Mažiausias kiekybinis skersmens stuburo galva buvo 0, μm. Kiekybinių segmentų ilgis buvo 45—55 μm.

Nuorodos Atvirkštinė matrica tam tikros matricos, tai matrica, padauginta iš originalo, suteikia tapatumo matricą.

Kiekvienas neuronas Matricos nario padidejimas suskirstytas į vieną segmentą, o mažiausias stuburo galvos skersmuo buvo 0, 15 μm. Morfologinius matavimus atliko asmuo, kuris nežinojo apie gydymo grupes. Skiltelių paruošimas elektrofiziologijai. Smegenys buvo pašalintos iš kaukolės ir μm storio koronaliniai NAc skyriai buvo gauti naudojant vibratomą VTS Leica vibratome, Leica Microsystems. Skiltelės inkubuojamos 25 ° C temperatūroje iki įrašymo.

Visų ląstelių įrašymas in vitro. Slopinantis sinaptinis perdavimas buvo blokuojamas, naudojant pikotoksiną 50 μM. Norint sukelti EPSC, į įrašytą ląstelę buvo įdėtas μm dorsomedialinis bipolinis stimuliuojantis elektrodas FHCkad maksimaliai padidėtų prelimbinių afferentų stimuliavimo galimybės.

Įrašai buvo renkami kas 20 s.